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術中快速冰凍:患者還躺在手術室 醫生在等些什麼?

術中快速病理,也稱術中冰凍,是手術室與病理科的冰雪奇緣。

術中快速

有啥用?

同一個器官的不同疾病,即使都要進行手術,手術的範圍也是不一樣的。只有當患者確診為癌症時,外科醫生才能實施相應的「癌症手術」。

之前我們曾經講過,癌症確診需要病理檢查,也就是在腫瘤上取一點樣本,放在顯微鏡下觀察。

為了取這些樣本,醫生們想了各種辦法,既要將身體損害降到最低,又要將醫療器械探入體內取樣。我們熟悉的胃鏡就是其中之一。

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胃鏡概念圖

但是……

不是所有病變都能通過內鏡、穿刺這樣的手段取出來檢查。這時候怎麼才能確定是不是要進行「癌症手術」呢?

我們還曾經講過,手術室切下來的病變,也會送到病理科進行病理檢查。其中有一項檢查內容,就是病變到底有沒有「切乾淨」

但是……

手術都做完了,就算知道「沒切乾淨」,豈不是只能亡羊補牢了?為什麼不能手術期間就檢查一下切緣呢?

術中快速冰凍,就是解決這些問題的一項檢查。聽名字就知道,它的特點就是「快」。

有多快呢?通常可以在30分鐘內給出檢查結果。

有了這項技術,手術前無法確定手術範圍的患者,可以先進行手術,在手術室取出樣本送到病理科,在手術室等待30分鐘得到結果後,當場決定手術範圍。

需要在手術中確定是否切乾淨的患者,也可以在手術間等待30分鐘,假如真的沒有「切乾淨」,還可以繼續手術擴大切除範圍。

可以說這30分鐘,是世界上最漫長的30分鐘了。在這30分鐘內具體發生了些什麼呢?

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電視劇里術中快速冰凍檢查的過程(來自日劇《Fragile》)

是不是看花眼了?我們來分解步驟。

術中快速

咋弄的?

手術室切下的人體組織送到病理科,依然需要先「取材」。為了保證速度,通常一處檢查部位只取1~2塊標本。

既然叫術中快速冰凍,那除了「」,就是「」了。

以前我們也講過,想把人體組織切成幾微米厚的薄片,直接切軟趴趴的肉是不行的。

就算切涮羊肉片,也得先凍一凍再切不是?

也不知道是不是受了中國涮羊肉的啟發,總之呢,一百多年前,西洋人發明了用於病理檢查的冰凍切片技術

冰凍切片和石蠟切片一樣,要想切,先得製成「塊」。

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切羊肉片也要先製成「羊肉塊」。

不管是石蠟切片還是冰凍切片,「製成塊」這個步驟,主要靠的就是「包埋」。

石蠟切片是用石蠟製成「蠟塊」,冰凍切片是用水制「冰塊」嗎?

還真不是。冰凍切片反而不能碰水,水在冷凍時形成的冰晶,會十分影響切片的質量,對細胞和組織的形態產生破壞,極大地干擾病理醫師的診斷。

真要說起來,冰凍切片的「冰塊」,外形有點像「雪糕」。再說了,「雪糕」也應該比「冰塊」好切啊!

冰凍切片所用的包埋劑,通常使用OCT包埋劑,是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物,長得有點像膠水。特點就是好凍,好切,溶於水

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這種膠水可不便宜。

上圖就是OCT包埋劑塗到組織托盤表面,放入冰凍切片機後,迅速冷凍的過程。

速度快得像被愛莎施了魔法。

要問切片機里溫度是有多低,這可是門學問,不同組織需要的溫度是不一樣的。不過大致倒也沒多低,反正不如東北最冷的時候冷(最多打個平手?)。

如果直接在冰凍切片機里塗這種「膠水」,效果是醬嬸兒的:

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這裡塗完以後還放上了需要製片的組織

速凍完成以後,就要切片和貼片了。貼片就是把切好的薄薄一層組織,貼到玻璃片(載玻片)上。

這需要經驗豐富的病理技術員完成。

具體是怎麼做的?憋說話,看圖:

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切片和貼片

貼好的切片需要立刻放入固定液里固定,時間通常不超過1分鐘。

這時,載玻片上的組織切片幾乎是透明的,想在顯微鏡下看清楚,需要染上色。染色方法與常規石蠟切片大致上相同,都是HE染色。

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染色完成後,滴加樹脂膠用蓋玻片覆蓋,就是呈現在病理醫師面前的冰凍切片了。

聽起來很複雜,實際上這個過程只需要10分鐘左右的時間。

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術中快速

萬能嗎?

有了這麼酷的技術,我們還要石蠟切片幹啥?都去做冰凍好了呀!

很遺憾,並不能。術中冰凍僅僅是一個粗略的判斷,遠遠無法代替慢工出細活的石蠟切片。

前面我們提到過,為了保證速度,一處檢查部位通常只取1~2塊標本製片。但是很多腫瘤有一種叫做「異質性」的特點。說白了就是同一塊腫瘤,不同的區域長得還有可能不一樣。

當然了,除了有可能長得不一樣,還有很多其它不一樣的地方,我們在這先不做討論。

那麼問題來了,醫生只能盡量選擇從外表看起來最具有代表性的區域進行製片,但仍然有時取不到最典型的區域。

那我不圖你30分鐘出結果,我等倆小時,你多取一些,我慢慢等總可以了?總比石蠟切片等好幾天強啊!

很遺憾,冰凍切片的製作方式較為簡略,還會導致鏡下形態存在一些假象。術中快速冰凍的診斷,也需要更高素質的病理醫師。

我們前面說過,水在冷凍時形成的冰晶會影響診斷,所以不能用水進行包埋。但是有些人體組織本身就含有大量水分,在進行冰凍切片診斷時就會受到限制。

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冰晶形成

冰凍切片還可能會造成組織過度收縮,給診斷造成困難。冰凍處理後的細胞會出現體積脹大、拉長、細胞內空泡等變化,細胞核也會產生一定的變形。

還有很多疑難病例,即使是石蠟切片都極難確切診斷,僅憑冰凍切片更無法診斷明確。況且我們之前介紹的免疫組化技術,尚未廣泛應用於冰凍切片。

國內外報道的術中冰凍診斷準確率在97%左右,是存在一定風險的,而且不能完全避免。

還有一點就是,由於成本較高,冰凍切片較常規石蠟切片的單價更昂貴,對於需要製作大量切片的惡性腫瘤患者來說,會造成更大的經濟壓力

權衡利弊

怎麼辦?

術中快速冰凍的局限無法避免,然而對於一些患者手術範圍的選擇起到決定性作用。

於是對於需要做術中冰凍診斷的患者,通常採取這樣的方式:

對於送檢的快速冰凍標本,醫生取所需檢查的1~2塊組織進行冰凍切片

另取更多的病變組織,製作蠟塊進行石蠟切片

對於冰凍後的那1~2塊組織,切片診斷後也會製作成蠟塊,其切片稱為「冰凍剩餘」切片

手術中,病理醫師對冰凍切片進行大致診斷,手術醫生根據這個診斷做出手術方案的選擇。

手術後,用幾天時間對石蠟切片和冰凍剩餘切片進行細緻觀察,複核術中診斷,並且做出更細緻的診斷。

快速冰凍往往止步於判斷手術方式,而這個更細緻的診斷往往可以得到更多的信息,比如判斷患者的預後,指導術後的輔助治療等等。

還有一些通過冰凍切片無法做出診斷的病例,更要等待術後的石蠟切片才能決定下一步是否還需要二次手術。雖然二次手術會造成一定的負面影響,但是術中冰凍也並非萬能,這一點是一定要清楚的。

總結起來就是這樣:

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好了,以上就是關於術中快速冰凍診斷技術的全部介紹。

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